Một trong những cách định tính protein đó là chạy điện di protein bằng phương pháp SDS-PAGE
Xử lý mẫu
Xử lý mẫu
- Thêm 60 μl H2O + 2,5 μl lysozyme nồng độ 50 mg/ml vào eppendorf có chứa mẫu.
- Đảo nhẹ, ủ ở nhiệt độ 37oC trong 30 phút.
- Thêm 15 μl sample buffer 5X. Vortex kỹ.
- Biến tính ở nhiệt độ 95oC trong 5 phút.
- Ly tâm 10000 vòng trong 5 phút.
- Hút dịch nổi
Chạy điện di SDS-PAGE
- Nạp 7 μl mẫu vào mỗi giếng.
- Tiến hành điện di protein với hiệu điện thế 120V và cường độ cho mỗi gel là 25 mA
- Khi hoàn tất quá trình điện di, lấy gel ra khỏi kính, cắt bỏ phần gel gom và nhuộm phần gel còn lại bằng thuốc nhuộm trong 30 phút.
- Giải nhuộm
- Thực hiện quá trình giải nhuộm cho đến khi nền gel trở nên trong suốt, không màu và hiện rõ vạch protein trên gel.
Dưới đây là hình ảnh thể hiện kết quả chạy điện di protein bằng phương pháp SDS-PAGE, ở các nồng độ IPTG khác nhau ảnh hưởng đến khả năng biểu hiện của protein.
Share this
EmoticonEmoticon