Trong các sản phẩm đã qua chế biến vẫn còn chứa DNA, bạn có thể tách chiết thu DNA tinh sạch từ những sản phẩm đó bằng bộ kit GM quicker 4 sử dụng màng silica để hấp phụ lượng lớn DNA.
Bộ kit này áp dụng nguyên lý hấp phụ DNA vào silica với sự hiện diện của các ion hỗn hợp, DNA chứa trong các sản phẩm thực phẩm có thể chiết xuất mà không cần sử dụng dung môi hữu cơ, độc hại như phenol và chloroform. Màng gel silica đảm bảo hấp phụ hàm lượng DNA cao trong các sản phẩm thực phẩm hay các sản phẩm đã qua chế biến.
Khối lượng mẫu khuyến cáo khi sử dụng cho tách chiết và tinh sạch này là 50 mg cho các dạng hệ sợi nấm, 1 gram cho viên nén, 1 gram cho nấm khô, nhưng chỉ cần 0,1 gram cho bột và đông khô. Những mẫu có cấu trúc chưa mịn thì nghiền chúng mịn thành bột. Những mẫu lỏng, bột mịn thì cân sử dụng trực tiếp không cần qua tiền xử lý. Sau khi thu mẫu, thực hiện bước ly trích và tinh sạch DNA bằng kit GM quicker 4.
Các bước thực hiện:
-
Nghiền 1g mẫu sản phẩm cho vào ống falcon.
-
Bổ sung các chất sau theo thứ tự: 4 ml GE1 Buffer, 10 μl
RNase A, 2 μl α-Amylase, 20 μl Proteinase K.
-
Ly tâm nhanh, thu phần dưới đáy. Sau đó, trộn đều mẫu trong
30-60 giây.
-
Ủ 65 °C trong 30 phút. Cách 10 phút thì trộn đều mẫu 10 giây.
-
Cho 400 μl GE2-M Buffer và trộn đều mẫu.
-
Ly tâm (≥ 4.000 x g, 5 phút,
4°C).
-
Hút 800 μl dịch nổi vào epp 2ml.
-
Thêm 600 μl GB 3 Buffer, trộn đều mẫu 10-12 lần.
-
Ly tâm (≥ 10.000 x g, 5 phút, 4°C). Thu dịch nổi
(*) cho vào epp 2ml.
-
Lấy 700 μl dịch nổi cho vào cột, ly tâm (≥ 10.000 x g, 1 phút, 4°C). Loại bỏ dịch.
-
Thu toàn bộ dịch nổi (*) cho vào cột, ly tâm (≥ 10.000 x g, 1 phút, 4°C) và loại bỏ dịch nổi.
-
Thêm 600 μl GE Buffer cho vào cột. Ly tâm (≥ 10.000 x g, 1 phút, 4°C). Loại bỏ dịch nổi.
-
Chuyển cột sang một epp 1.5 ml mới.
-
Hút 50 μl TE (pH 8.0) nhỏ từng giọt lên màng lọc, ủ 3 phút ở
nhiệt độ phòng.
-
Ly tâm (≥ 10.000 x g, 1 phút, 4°C), thu dịch.
-
Đo nồng độ DNA tổng số và chạy điện di kiểm tra.
Các thao tác chỉ cần cẩn thận, đặc biệt những bước hút dịch không nên hút lẫn nhiều tủa. Chúc bạn tách chiết tinh sạch DNA thành công với hàm lượng nồng độ cao, không bị tạp nhiễm.
Share this
EmoticonEmoticon