Chuẩn bị tế bào E. coli khả nạp
- Cấy 1 khuẩn lạc E. coli vào 30 ml môi trường LB, lắc qua đêm ở 37°C.
- Cấy chuyền sang 300 ml môi trường LB, lắc ở 37°C.
- Đo OD600 của dịch nuôi cấy cho đến khi đạt 0,6.
- Ly tâm 6000 vòng/phút trong 2 phút, thu sinh khối đổ bỏ dịch.
- Các bước tiếp theo thực hiện trong bồn đá lạnh.
- Huyền phù sinh khối với 20 ml CaCl2 100 mM lạnh để rửa.
- Ly tâm 6000 vòng/phút trong 2 phút, thu sinh khối, loại bỏ dịch.
- Thêm 6 ml CaCl2 100 mM lạnh + 600 μl glycerol (100%), huyền phù nhẹ.
- Chia đều ra eppendorf, mỗi ống 100 μl, giữ ở -80°C.
- Cho 100 μl tế bào khả nạp E. coli vào eppendorf chứa 10 μl sản phẩm đột biến.
- Ủ trong đá 30 phút, sốc nhiệt 42°C trong 60 giây và chuyển nhanh vào bồn đá ủ 5 phút.
- Thêm vào 1 ml môi trường LB.
- Lắc mẫu ở 37°C trong 1 giờ, tốc độ lắc 250 vòng/phút.
- Ly tâm 6000 vòng/phút, trong 2 phút, đổ bỏ một phần dịch nổi.
- Huyền phù dịch tế bào và trải trên đĩa thạch LB - Agar - Amp, ủ ở 37°C trong 16 giờ.
Share this
EmoticonEmoticon